實驗前準(zhǔn)備

• 試劑和儀器檢查：仔細(xì)檢查試劑盒內(nèi)的試劑是否齊全、有無過期或變質(zhì)現(xiàn)象。確保 Qubit 儀器已校準(zhǔn)并能正常運行，可使用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定期校準(zhǔn)驗證，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

• 樣本保存與處理：對于 RNA 樣本，盡量在新鮮組織或細(xì)胞收獲后立即進(jìn)行提取，避免長時間放置導(dǎo)致 RNA 降解。如果不能及時提取，應(yīng)將樣本保存在合適的低溫環(huán)境（如 - 80℃）中，并使用 RNase 抑制劑等保護(hù)劑。在提取 RNA 過程中，要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，使用無 RNase 的耗材和試劑，防止 RNA 酶污染。

實驗過程

• 樣本稀釋：根據(jù)試劑盒的要求和樣本的初始濃度，準(zhǔn)確稀釋 RNA 樣本。一般來說，應(yīng)避免樣本濃度過高或過低，因為這可能會影響熒光染料與 RNA 的結(jié)合效率，進(jìn)而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性?？梢韵冗M(jìn)行預(yù)實驗，確定合適的稀釋倍數(shù)范圍。例如，對于濃度較高的 RNA 樣本，可進(jìn)行 10 倍、50 倍、100 倍等不同倍數(shù)的稀釋，然后檢測其濃度和質(zhì)量指標(biāo)，選擇結(jié)果最準(zhǔn)確、重復(fù)稀釋倍數(shù)。

• 染料混合：將 Qubit RNA IQ 染料與樣本充分混合是確保準(zhǔn)確檢測的關(guān)鍵步驟。按照試劑盒說明書的要求，精確吸取適量的染料到稀釋后的樣本中，使用移液器輕輕吹打或渦旋振蕩，使染料與 RNA 均勻混合。注意避免產(chǎn)生氣泡，因為氣泡可能會干擾熒光信號的檢測?；旌虾?，讓樣本在室溫下孵育適當(dāng)?shù)臅r間，使染料與 RNA 充分結(jié)合。

• 檢測步驟：將混合好的樣本加入到 Qubit 儀器的檢測管中，確保檢測管清潔、無殘留雜質(zhì)。將檢測管放入儀器中時，要按照正確的方向和位置放置，以保證儀器能夠準(zhǔn)確讀取熒光信號。在檢測過程中，避免儀器受到震動或干擾，同時確保檢測環(huán)境的溫度和濕度穩(wěn)定，因為這些因素可能會對熒光信號產(chǎn)生影響。

實驗后處理

• 數(shù)據(jù)記錄與分析：及時、準(zhǔn)確地記錄檢測結(jié)果，包括 RNA 濃度、RIN 值、28S/18S 比值等信息。對數(shù)據(jù)進(jìn)行仔細(xì)分析，檢查是否存在異常值或不符合預(yù)期的結(jié)果。如果發(fā)現(xiàn)問題，應(yīng)及時排查原因，如是否是樣本處理不當(dāng)、儀器故障或操作失誤等，并考慮重新進(jìn)行實驗。

• 儀器和耗材清潔：實驗結(jié)束后，立即清潔 Qubit 儀器和使用過的檢測管等耗材。對于儀器，可按照說明書的要求進(jìn)行定期維護(hù)和清潔，如使用專用的清潔液擦拭儀器內(nèi)部的光學(xué)部件，防止灰塵和雜質(zhì)積累影響檢測性能。檢測管等一次性耗材應(yīng)按照生物安全規(guī)定進(jìn)行妥善處理，避免交叉污染。